PCR digital de gotas (ddPCR)

La reacción en cadena de la polimerasa digital (dPCR) es un refinamiento biotecnológico de los métodos convencionales de reacción en cadena de la polimerasa que se puede utilizar para cuantificar directamente y amplificar clonalmente las cadenas de ácidos nucleicos, incluidos el ADN, el ADNc o el ARN.La diferencia clave entre la dPCR y la PCR tradicional radica en el método de medición de las cantidades de ácidos nucleicos, siendo el primero un método más preciso que la PCR.Al igual que la PCR, en la dPCR también se realiza una sola reacción dentro de una muestra, pero la muestra se divide en numerosas particiones y la reacción se realiza en cada partición por separado.Con esta división, las cantidades de ácido nucleico pueden recolectarse y medirse con mayor precisión y sensibilidad.La técnica se usa regularmente para la amplificación clonal de materiales para la secuenciación de próxima generación y ha demostrado ser beneficiosa para analizar cambios en las secuencias de genes, incluidas las variantes del número de copias y las mutaciones puntuales.Droplet Digital PCR (ddPCR) es una técnica para dPCR en la que una reacción de muestra de 20 microlitros se divide en gotas de aceite de 20 000 nanolitros utilizando una técnica de emulsión de agua y aceite, se termocicla en un cartucho de microfluidos y la amplitud de fluorescencia de cada gota en cada pocillo de muestra se lee utilizando un escáner de gotas.