Literatura Introducción |Rainsure Digital PCR Technology y multitype Plasmodium Typing and Treatment Quantitative Monitoring

_{Título: Un ensayo multiplex rápido de parásitos de la malaria humana mediante PCR digital}

_{DOI: 10.1016/j.cca.2022.12.001}

_{Revista: Clínica Química Acta}

_{Unidad: Hospital de Huashan afiliado a la Universidad de Fudan}

_{Publicado: diciembre de 2022}

_{Plataforma de investigación: Sistema de PCR digital Rainsure Scientific DropDx-2044}

_{En diciembre de 2022, el equipo de Ming Guan y Haoqin Jiang del Hospital Huashan Afiliado a la Universidad de Fudan publicó el artículo 'Un ensayo multiplex rápido de parásitos de la malaria humana mediante PCR digital' en la revista 'Clinica Chimica Acta'.}

_{Este estudio estableció un novedoso sistema de PCR digital multiplex centrado en la detección molecular rápida de la infección por paludismo de baja concentración.Es adecuado para el diagnóstico de la infección por paludismo mixto y el control continuo de múltiples muestras, y como un importante método de detección clínica para la cuantificación absoluta de patógenos, para garantizar un diagnóstico rápido y preciso de los pacientes con sospecha de infección por paludismo.La sensibilidad analítica de la PCR multiplex es tan baja como 0,557 copias/μl, la sensibilidad es del 98,0 % y la especificidad del 100 %, lo que es especialmente adecuado para el diagnóstico de la infección por paludismo de baja concentración y el seguimiento del efecto curativo durante el tratamiento .}

_{Fondo de investigación}

_{La malaria, el SIDA y la tuberculosis son reconocidos mundialmente como uno de los tres grandes problemas públicos que ponen en peligro la vida y la salud humana.Son una enfermedad parasitaria causada por Plasmodium y transmitida por mosquitos Anopheles.Según el último Informe mundial sobre paludismo de la OMS, hay aproximadamente 241 millones de casos de paludismo en todo el mundo y 627 000 muertes por paludismo.En comparación con el año anterior, hubo alrededor de 14 millones de casos nuevos y 69.000 nuevas muertes.}

_{Plasmodium es una espora transmitida por el mosquito Anopheles y es el agente causal de la malaria.Cuatro tipos principales de Plasmodium que parasitan el cuerpo humano, incluidos Plasmodium vivax, Plasmodium malariae, Plasmodium falciparum y Plasmodium ovale.Estos parásitos de la malaria tienen dos huéspedes, los mosquitos Anopheles y los humanos.Parasitan las células hepáticas y los glóbulos rojos sucesivamente en humanos.En los eritrocitos, además de la proliferación de esquizofitos, algunos merozoítos forman gametofitos y comienzan el desarrollo inicial de la reproducción sexual.}

_{En 2021, con cero casos autóctonos de paludismo en cuatro años, China fue reconocida con éxito por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como país libre de paludismo.En la actualidad, los casos de infección por malaria importados principalmente del extranjero.}

_{Métodos de búsqueda}

_{Se seleccionó un total de 39 pacientes con malaria positiva diagnosticados por microscopía del Hospital Huashan de 2016 a 2021;Se recogieron 70 muestras de sangre de estos pacientes.Además, en este estudio se incluyeron 20 personas sanas, 20 pacientes febriles y 6 pacientes con otros tipos de parásitos infectados en la sangre.Cada muestra de sangre se analizó en paralelo mediante frotis de sangre y dPCR.Al optimizar el sistema único de detección de sonda marcada con fluorescencia cuádruple, se verificó la capacidad cuantitativa precisa de dPCR y se obtuvo el número exacto de copias por unidad de volumen de muestras de sangre de malaria clínica.También se utilizó una prueba de diagnóstico rápido para validar los resultados obtenidos por dPCR.}

_{Resultados de la investigacion}

_{El sistema dPCR permite un rápido diagnóstico y cuantificación de muestras de ADN de malaria.La sensibilidad analítica de la dPCR multiplex fue tan baja como 0,557 copias/μl (IC del 95 %: 0,521-0,607), y su sensibilidad para el diagnóstico de muestras clínicas fue del 98,0 % y su especificidad del 100 %.Además, el sistema dPCR detectó tres muestras de coinfección múltiple por Plasmodium, incluido un caso de coinfección triple por Plasmodium.Mediante el análisis continuo de muestras de sangre diarias de los 39 pacientes del estudio, la dPCR puede controlar la eficacia de los tratamientos farmacológicos.Los resultados muestran que el rango de concentración de ADN de Plasmodium falciparum después de la medicación es de 0 copias/μL-5474 copias/μL, lo que permite monitorear en tiempo real el efecto curativo de los medicamentos antipalúdicos.El estudio también encontró que Plasmodium se detectó más fácil y positivamente usando muestras de células sanguíneas sin plasma que con sangre entera.}

_{El sistema de PCR digital multiplex puede detectar claramente dos o tres tipos de muestras de sangre completa de infecciones mixtas de paludismo, para diagnosticar eficazmente múltiples infecciones mixtas de paludismo.Este es un complemento ideal para el método tradicional de examen microscópico de frotis de sangre, que puede compensar oportunamente la detección perdida de malaria atípica en frotis de sangre y pacientes con infecciones mixtas de baja concentración, lo que ayuda a los médicos a ajustar los regímenes de medicación de manera oportuna.}

_{El monitoreo continuo de un paciente por hasta 20 días mostró que la PCR digital puede cuantificar con precisión la concentración de malaria en la sangre total del paciente, mostrar visualmente el estado de infección real del paciente y reflejar el cambio en la tasa de infección de malaria en el paciente a tiempo , logrando el propósito de monitorear en tiempo real la eficacia de los medicamentos antipalúdicos, es proporcionar evidencia de laboratorio más confiable para la eliminación de la malaria en los pacientes.}