-
A En el proceso de configuración del sistema, los componentes como los cebadores y las enzimas están en exceso, pero las plantillas no están en exceso. Las moléculas de ADN de la plantilla ingresan aleatoriamente a cada sistema de reacción pequeña. Después de la amplificación por PCR, el sistema que contiene la plantilla completa la amplificación, y el sistema no contiene la plantilla sin amplificación.
-
A Causa: la cepa está mutada y la sonda actual no es adecuada para la detección; No se puede detectar el ácido nucleico causado por el método de extracción (no se puede detectar las bacterias, hongos, etc. incluidos en la muestra);
Verificación de exclusión: la extracción de ADN del cultivo, seguida de amplificación con nuestras sondas, se puede verificar; Se recomienda que las pruebas de hemocultivo y ácido nucleico sean la misma muestra de sangre.
-
A Estándar de juicio ≥ 3 gotas positivas, pero para las gotas positivas en el punto crítico, es necesario llevar a cabo un análisis en profundidad en combinación con materiales de control de calidad negativos/ positivos. Cuando hay una línea vertical de señales, se juzga como una señal no positiva.
Muestras de baja concentración, se puede seleccionar un búfer múltiple más alto para el ajuste de carga de la muestra.
-
A Plasma: se recomienda ≥ 2 ml, los componentes son relativamente simples y se elimina la contaminación del ADN humano. La composición del ácido nucleico es más simple, y la concentración de ácido nucleico bacteriano es mayor, lo que es conveniente para la detección.
Nota: La velocidad de rotación no debe ser demasiado alta durante la centrifugación, de lo contrario conducirá fácilmente a la pérdida de bacterias intracelulares y afectará el resultado de la prueba final;
Sangre entera: se recomienda ≥4 ml, los componentes son relativamente completos y la consistencia con las muestras de cultivo sanguíneo es buena, pero hay contaminación del ADN humano.
-
A Bacterias (bacterias gram-positivas, bacterias gramnegativas), hongos invasivos, virus. Al mismo tiempo, también se puede llevar a cabo la detección de genes de resistencia a los medicamentos.
-
A Se recomienda establecer un experimento de control para la división. Cuando no esté establecido, generalmente use la intensidad de fluorescencia de 3000 como punto umbral, o use el grupo negativo como referencia para juzgar lo positivo. Puede consultar la experiencia de la citometría de flujo para hacer una división.
-
A La cuantificación de fluorescencia se basa en la curva de amplificación. La señal de detección de cada ciclo se calculará mediante el logaritmo de 2 a la potencia de N, que solo puede usarse para distinguir la diferencia de más de 2 veces. El sistema de PCR digital puede detectar diferencias de expresión génica tan bajas como 0.1 veces mediante la fórmula de cálculo de distribución de Poisson.
-
A Para la frecuencia de mutación, la PCR digital puede alcanzar el 0.01% o menos, y se puede lograr una copia única para los microorganismos; RT-PCR solo puede alcanzar el 1%.
