Aceite de generación de gotas

En la PCR digital de gotas, el aceite de generación de gotas juega un papel crucial en el proceso de división de la mezcla de reacción de PCR en miles o millones de gotas individuales. Estas gotas sirven como vasos de reacción discretos, cada uno que contiene una fracción del ADN objetivo o las moléculas de ARN.

El aceite de generación de gotas es un fluido especializado a base de aceite que se utiliza para crear y estabilizar las gotas en DPCR. El aceite es inmiscible con la mezcla de reacción de PCR, formando una fase distinta que rodea y encapsula las gotas de la mezcla de reacción. Esta barrera de aceite ayuda a aislar y compartimentar cada reacción de PCR, evitando la contaminación cruzada y garantizando una cuantificación precisa de los ácidos nucleicos objetivo.

Las características clave del aceite de generación de gotas de lluvia incluyen:

1. Inmiscibilidad: el aceite de generación de gotas es inmiscible con la mezcla de reacción de PCR. Esto asegura que el aceite forma gotas distintas, separándolas de las gotas de mezcla de reacción.

2. Estabilidad: el aceite es estable y mantiene sus propiedades físicas durante el proceso de ciclo de PCR. No se evapora, degrada ni causa interferencia con la reacción de PCR.

3. Transparencia óptica: el aceite tiene una alta transparencia óptica para permitir una detección y análisis eficientes de las señales fluorescentes generadas durante la DPCR.

4. Inertidad: el aceite es químicamente inerte para evitar interferir con la reacción de PCR y la amplificación del ADN.

Durante el proceso DPCR, la mezcla de aceite de generación de gotas y reacción se emulsionan. Este proceso de emulsificación crea una suspensión estable de gotas, con cada gota que contiene una sola molécula objetivo o ninguna. Las gotas generadas con la ayuda del aceite de generación de gotas se someten posteriormente al ciclo térmico, donde tiene lugar la amplificación por PCR. Después de la amplificación, las gotas se analizan individualmente para determinar la presencia o ausencia de la molécula objetivo en función de las señales de fluorescencia.

En resumen, el aceite de generación de gotas es un componente crítico en la PCR digital de gotas, ya que permite la formación y estabilización de gotas individuales que contienen la mezcla de reacción de PCR. Permite la partición y el aislamiento precisos de los ácidos nucleicos objetivo, facilitando cuantificación y análisis precisos en los ensayos de DPCR.