Introducción de literatura | Tecnología de PCR digital de lluvia y tipificación de plasmodio multype y monitoreo cuantitativo de tratamiento

_{Título: Un ensayo multiplex rápido de parásitos de malaria humana por PCR digital}

_{Doi: 10.1016/j.cca.2022.12.001}

_{Revista: Clinica Chimica Acta}

_{Unidad: Hospital Huashan afiliado a la Universidad de Fudan}

_{Publicado: diciembre de 2022}

_{Plataforma de investigación: Rainsure Scientific DROTDX-2044 Sistema de PCR digital}

_{En diciembre de 2022, el equipo de Ming Guan y Haoqin Jiang del Hospital Huashan afiliado a la Universidad Fudan publicó el artículo 'Un ensayo rápido multiplex de parásitos de malaria humana por PCR digital' en la revista 'Clinica Chimica Acta '.}

_{Este estudio estableció un nuevo sistema de PCR digital multiplex centrado en la detección molecular rápida de la infección por malaria de baja concentración. Es adecuado para el diagnóstico de infección de malaria mixta y monitoreo continuo de múltiples muestras, y como un importante método de detección clínica para la cuantificación absoluta de los patógenos, para garantizar un diagnóstico rápido y preciso de pacientes sospechosos de infección por malaria. La sensibilidad analítica de la PCR multiplex es tan baja como 0.557 copias/μl, la sensibilidad es del 98.0%y la especificidad es del 100%, lo que es especialmente adecuado para el diagnóstico de infección por malaria de baja concentración y el monitoreo del efecto curativo durante el tratamiento.}

_{Antecedentes de investigación}

_{La malaria, el SIDA y la tuberculosis se reconocen en todo el mundo como uno de los tres principales problemas públicos que ponen en peligro la vida y la salud humana. Son una enfermedad parasitaria causada por Plasmodium y transmitida por mosquitos de Anopheles. Según el último informe mundial de la malaria, hay aproximadamente 241 millones de casos de malaria en todo el mundo y 627,000 muertes por malaria. En comparación con el año anterior, hubo alrededor de 14 millones de casos nuevos y 69,000 nuevas muertes.}

_{Plasmodium es una espora transmitida por el mosquito Anopheles y es el agente causal de la malaria. Cuatro tipos principales de Plasmodium que parasitan el cuerpo humano, incluidos Plasmodium vivax, Plasmodium malariae, Plasmodium falciparum y Plasmodium ovale. Estos parásitos de la malaria tienen dos anfitriones, Anopheles mosquitos y humanos. Parasitan en células hepáticas y glóbulos rojos sucesivamente en humanos. En los eritrocitos, además de la proliferación de esquizofitos, algunos merozoitos forman gametofitos y comienzan el desarrollo inicial de la reproducción sexual.}

_{En 2021, con cero casos de malaria indígena en cuatro años, China fue reconocida con éxito por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como un país libre de malaria. En la actualidad, los casos de infección por malaria se importaron principalmente del extranjero.}

_{Métodos de investigación}

_{Un total de 39 pacientes con malaria positivos diagnosticados por microscopía fueron seleccionados del Hospital Huashan desde 2016 hasta 2021; Se recogieron 70 muestras de sangre de estos pacientes. Además, en este estudio se incluyeron 20 personas sanas, 20 pacientes febriles y 6 pacientes con otros tipos de parásitos infectados por la sangre. Cada muestra de sangre se probó en paralelo por frotis de sangre y DPCR. Al optimizar el sistema de detección de sonda marcado con fluorescentes cuadrúpanos de un solo sistema, se verificó la capacidad cuantitativa precisa de DPCR, y se obtuvo el número de copias preciso por unidad de volumen de muestras de sangre de malaria clínica. También se utilizó una prueba de diagnóstico rápida para validar los resultados obtenidos por DPCR.}

_{Resultados de la investigación}

_{El sistema DPCR permite un diagnóstico rápido y cuantificación de muestras de ADN de malaria. La sensibilidad analítica de DPCR multiplex fue tan baja como 0.557 copias/μl (IC 95%0.521-0.607), y su sensibilidad para el diagnóstico de muestras clínicas fue del 98.0%, y su especificidad fue del 100%. Además, el sistema DPCR detectó tres muestras de coinfección de Plasmodium múltiples por el sistema DPCR, incluido un caso de coinfección triple de Plasmodium. Al probar continuamente muestras de sangre diaria de los 39 pacientes del estudio, DPCR puede monitorear la eficacia de los tratamientos farmacológicos. Los resultados muestran que el rango de concentración del ADN de Plasmodium falciparum después de la medicación es 0 copia/μL-5474 copia/μl, realizando el monitoreo en tiempo real del efecto curativo de los fármacos antipalúdicos. El estudio también encontró que Plasmodium se detectó más fácil y más positivamente usando muestras de glóbulos sanguíneos con plasma que la sangre completa.}

_{El sistema de PCR digital multiplex puede detectar claramente dos o tres tipos de muestras de sangre entera de infección mixta de malaria, para diagnosticar efectivamente múltiples infecciones mixtas de malaria. Este es un suplemento ideal para el método tradicional de examen microscópico de frotis de sangre, que puede compensar oportunamente la detección perdida de malaria atípica en frotis de sangre y pacientes con infección mixta de baja concentración, lo que ayuda a los clínicos a ajustar los regímenes de medicación de manera oportuna.}

_{El monitoreo continuo de un paciente durante hasta 20 días mostró que la PCR digital puede cuantificar con precisión la concentración de malaria en la sangre completa del paciente, muestra visualmente el estado de infección real del paciente y reflejar el cambio de la tasa de infección de la malaria en el paciente en el tiempo, logrando el propósito de monitorear en tiempo real la eficacia de los medicamentos antimalariales, es proporcionar más evidencia de laboratorio para la enfermedad de la malaria en los pacientes.}