Vistas:0 Autor:Editor del sitio Hora de publicación: 2024-11-13 Origen:Sitio
-Acilita en la verdadera implementación rápida de la tecnología de PCR digital en el campo NIPT
A mediados de octubre de 2024, The Chinese Journal of Medical Genetics, Volumen 41, número 10, publicó un artículo titulado 'Consenso de expertos sobre la aplicación de PCR digital Tecnología de detección prenatal no invasiva para la implementación inicial de la detección de trastorno cromosómico fetal ' ( evaluación '( https://r.yiigle.com https://rs.yiigle.com/cmaid/1517121 ,,, Doi: 10.3760/cma.j.cn511374-20240318-00176). El consenso explica los aspectos relevantes de DPCR-NIPT, que incluyen: requisitos básicos, alcance de la aplicación, proceso de servicio previo a la prueba, proceso de prueba, interpretación de informes, asesoramiento genético y limitaciones de la tecnología.
La imagen del equipo de PCR digital publicado en el consenso de expertos es la imagen original del instrumento Rainsure Scientific DropDX Series, y los detalles se pueden encontrar en la sección de equipos y visualización de productos del sitio web de Rainsure Scientific ( https://www.rainsuBio.com ).
La aneuploidía del cromosoma fetal es un componente importante de las pruebas de detección prenatales, que es beneficiosa para promover la eugenesia y mejorar la calidad del parto a través de la detección prenatal temprana y el diagnóstico. La prueba prenatal de aneuploidía es un enfoque tecnológico no invasivo, mínimamente invasivo o invasivo que examina a las mujeres embarazadas durante un cierto tiempo para evaluar el riesgo de trastornos de aneuploidía cromosómicos fetales o para confirmar aún más el diagnóstico. Los métodos de diagnóstico prenatales convencionales son invasivos, con amniocentesis, muestreo de villus coriónicos y muestreo de punción de venas umbilicales para el análisis de cariotipado, que conlleva un riesgo potencial de aborto espontáneo fetal o infección. El examen prenatal de rutina temprano y medio del Trimestre combina el examen de ultrasonido con el análisis de biomarcadores séricos, junto con información clínica como la edad materna, la edad gestacional, el peso y la presencia de diabetes, para calcular los valores de riesgo utilizando el software para la evaluación. Sin embargo, la sensibilidad y la especificidad de estos métodos son limitadas. En 1997, Lo et al. ADN fetal sin células descubierto (ADN de CFF) en la sangre periférica de las mujeres embarazadas, estableciendo las bases para pruebas prenatales no invasivas (NIPT) para la aneuploidía cromosómica fetal. En 2008, Lo et al. demostró aún más la viabilidad de la detección de aneuploidía del cromosoma fetal basada en el ADN de CFF en el plasma materno y la secuenciación del genoma a gran escala.
En esta etapa, las pruebas prenatales no invasivas basadas en NGS (secuenciación de la próxima generación) se han utilizado en los síndromes de la trisomía fetal 21, la trisomía 18 y la trisomía 13, y ha demostrado una alta sensibilidad, especificidad y tasa de detección en embarazos de alto riesgo. Sin embargo, NGS-NIPT se ve afectado por una variedad de factores que se originan en el feto, la madre, el proceso de secuenciación y el análisis de datos, lo que puede dar como resultado resultados falsos positivos o falsos negativos. Además, el costo de las pruebas NGS-NIPT es costoso, lo que dificulta la implementación de forma rápida y efectiva a gran escala.
Con la introducción de la tecnología microfluídica, la PCR digital (DPCR), que representa la tercera generación de tecnología PCR, ha demostrado una mayor eficiencia y sensibilidad de detección. Se ha demostrado que DPCR tiene el potencial de un desarrollo más directo, rápido y rentable en aplicaciones de NIPT de aneuploidía cromosómica. Además, la combinación de tecnologías DPCR-NIPT y NGS-NIPT para la detección puede mejorar aún más la precisión, seguridad y puntualidad de las pruebas de detección prenatal para aneuploidías cromosómicas fetales.
Además, las recomendaciones relacionadas con el consenso se resumen a continuación:
Resumen de recomendaciones.
[Recomendación 1] El costo de las pruebas DPCR-NIPT es comparable al de la detección serológica, mientras que su tasa de detección positiva es similar al de NIPT, lo que lo convierte en una alternativa prometedora al detección prenatal. Esto podría conducir a la formación de una estrategia de detección prenatal secuencial y una estrategia de diagnóstico de 'DPCR-NIPT para la detección inicial, NIPT para la detección secundaria y diagnóstico prenatal invasivo. '.
[Recomendación 2] Se recomienda que DPCR-NIPT se realice de acuerdo con los requisitos de personal, organización, reactivos y equipos.
[Recomendación 3] Refiriéndose a la detección serológica y NIPT, DPCR-NIPT se puede utilizar para la detección simultánea de Trisomy 21, Trisomy 18 y Trisomy 13. Además, dada que la incidencia y la carga del síndrome de Turner (45, X) y el síndrome de DiGeorge (22q11.2-Syndrome) no son inferiores a las de Turner 18 y 13, el síndrome de la trisomia 22q11.2) no son inferiores a las de Turner 18 y 13, el síndrome de TRISULONOME11, el síndrome de TRISULONOMO1. Las combinaciones 45, X y 22q11.2ds también se pueden realizar utilizando DPCR-NIPT.
[Recomendación 4] Se recomienda que las mujeres embarazadas sometidas a la detección de DPCR-NIPT se clasifiquen mediante poblaciones apropiadas, advertidas e inapropiadas, y para garantizar el consentimiento informado.
[Recomendación 5] Diferentes laboratorios pueden establecer procedimientos DPCR-NIPT estándar localizados y sistemas de control de calidad de acuerdo con sus propias condiciones y los procedimientos y el control de calidad previa e intra-prueba.
[Recomendación 6] Los criterios para determinar el riesgo de enfermedades cromosómicas fetales deben basarse en los resultados de DPCR-NIPT.
[Recomendación 7] Se deben proporcionar estrategias de asesoramiento genético y tratamiento para diferentes riesgos sugeridos por la prueba.
[Recomendación 8] Dadas las características de CFFDNA y DPCR-NIPT, se recomienda que las instituciones médicas establezcan un mecanismo retrospectivo 'seguimiento ~ de seguimiento' y también garantice que se realice un trabajo de seguimiento adecuado.
Con respecto a los desafíos técnicos de DPCR-NIPT
Instrumento: existen requisitos estrictos para el rendimiento del equipo. Dado que los dispositivos de PCR digitales utilizados para NIPT deben diferenciar entre las diferencias de número de copias de ADN CFF normales y anormales (generalmente menos del 4%), requieren una excelente precisión y reproducibilidad. Dado que la diferencia de número de copia entre el ADN CFF normal y anormal está dentro del 5%, aumentar el número de gotas (es decir, número de partición) para amplificar la cantidad total de ADNc en la muestra puede ampliar la diferencia en los números de copia de ADN CFF normales y anormales, mejorando la sensibilidad de detección.
En un estudio de DAI [16], se calculó el número mínimo de gotas requeridas en condiciones específicas. A un ADNmt del 5% (0.05) y un PDR del 30% (0.3), se requirieron aproximadamente 18,000 gotas o reacciones de PCR para distinguir un embarazo aneuploide de un embarazo aneuploide con un nivel de confianza del 95% (desviación estándar de 1.96 veces).
Reactivos: utilizados para NIPT requieren la realización de múltiples pruebas, cuantos más objetivos, más preciso, la prueba. El principio del reactivo es amplificar la diferencia de número de copia entre muestras fetales normales y anormales detectando múltiples objetivos. Por ejemplo, suponiendo una diferencia de número de copia del 1% entre un feto normal y anormal, la diferencia entre 100 copias de un objetivo es 1 copia. Si se prueban 10 objetivos, la diferencia se establecerá en 10 copias, lo que aumentará la sensibilidad de la prueba.
En el estudio de Lašáková [15], los autores utilizaron 16 pares de cebadores y dos sondas de ácido nucleico de bloqueo marcado con fluorescencia para el cromosoma 21 y el cromosoma 18, respectivamente. Esta prueba fue validada en un ensayo ciego en muestras de plasma de 30 mujeres embarazadas en riesgo de trisomía del síndrome de Down 21, con un rango de riesgo de 1: 4 a 1: 801. Los resultados de la prueba y los procedimientos de diagnóstico invasivos estaban en perfecto acuerdo (la sensibilidad, la especificidad, el valor predictivo positivo y el valor predictivo negativo fueron todo 100%). En un estudio de DAI [16], se usaron 10 conjuntos de sondas de cebadores para la prueba multiplex de los cromosomas 21, 18 y 13. En un estudio de TAN [14], 10 ng de ADNm roto y diferentes números de pares de cebadores (1, 5, 10 y 20 pares para Chr21 y Chr18, respectivamente) se utilizaron para verificar la relación entre los pares de cebadores y el número de objetivos de objetivos. Los resultados mostraron que la cantidad de moléculas de ADN objetivo detectadas dependía en gran medida del número de pares de cebadores, y que aumentar el número de pares de cebadores puede aumentar el número de moléculas de ADN objetivo detectadas, dada una cierta cantidad de ADN.
La selección de equipos de PCR digitales más sensibles y reactivos de PCR digital multiplex con precisión y diseñado y validado son clave para mejorar la sensibilidad y la especificidad del ensayo DPCR-NIPT.
Acerca de Rainsure Scientific Ltd. Co.
Rainsure Scientific es una empresa innovadora dedicada al diagnóstico de precisión. Adherirse a la misión de 'innovación, fabricación inteligente, promoción de la salud', Rainsure Scientific se dedica principalmente al desarrollo de plataformas de diagnóstico innovadoras y soluciones de diagnóstico IVD. La compañía ha desarrollado instrumentos científicos líderes en el mundo y productos de diagnóstico molecular, incluidas plataformas de investigación microfluídica, sistemas de PCR digitales y kits de reactivos de apoyo, basados en los avances tecnológicos continuos de la compañía en los campos de microfluídica y fabricación inteligente. Los miembros del equipo fundador de la compañía se graduaron de las universidades de la Ivy League y trabajaron para varios fabricantes de ciencias de la vida reconocidos internacionalmente, con una rica experiencia de la industria y perspectivas de vanguardia. Rainsure Scientific se compromete a empoderar a los clientes con tecnología innovadora y fabricación inteligente para fomentar el desarrollo de la industria de la salud.
